DJ Hero simulerer først og fremst turntablism, en musikalsk stil som brukes av diskjockeyer for å lage en ny mashup-sang ved å inkorporere en eller flere tidligere innspilte sanger spilt på platespillere sammen med lydeffektgeneratorer. Spillet har score-angrep-spill som ligner på Guitar Hero-spillene. Kontrolleren består av en trådløs kortstokk som består av en bevegelig platespiller som støtter 3 "stream"-knapper, en effektskive, en crossfader og en "Euphoria"-knapp; et skjult panel inneholder ekstra kontrollerknapper for å samhandle med spillkonsollen utenfor spillet. En del av kontrolleren kan tas av og festes på nytt for å tilpasse enheten for venstrehendte spillere. Noter beveger seg i en bue over en roterende plate på skjermen, og spilleren holder nede en av de 3 strømknappene for å spille noter; to knapper gjenspeiler de to sangene som brukes i den aktuelle miksen, og den tredje representerer samples å legge til miksen som kan justeres med effekthjulet. Spilleren må også hele tiden justere crossfaderen for å matche symbolene på skjermen, noe som endrer det relative volumet til sangene for å bringe én sang i forkant av miksen for en kort stund. Enkelte spor vises på skjermen som en serie med opp- eller nedpiler, som representerer skrapeseksjoner, som krever at spilleren snur platespilleren i pilenes retning mens du holder nede knappen for å score poeng, og etterligner ripingen av platenålen på vinylalbum. "Euphoria" tilsvarer Guitar Heros Star Power, samlet inn ved å fullføre spesifikke fraser i sangmiksen, kalt Perfect Regions, og kan slippes ut ved å trykke på Euphoria-knappen, doble spillerens nåværende multiplikator samt automatisk kryssfading når den er aktiv. Det er også en "Rewind"-måler som bygger gjennom konsekvent vellykket spilling, og når den er full, kan spilleren spole tilbake sangen for å fikse feil i fremføringen. Spilleren må fortsette å prestere bra, ellers vil ytelsesmåleren synke og musikksporet kuttes ut. Å svikte sangen er ikke mulig, i motsetning til i Guitar Hero-spill. En karrieremodus for én spiller er tilgjengelig, i tillegg til både konkurrerende og samarbeidende flerspillermodus ("DJ vs DJ"), som kan spilles lokalt eller eksternt. Ti sanger har blitt spesialmikset for også å støtte spilling med Guitar Hero og andre kompatible gitarkontrollere i en "DJ vs Guitar"-modus. Spillere kan også bruke en mikrofon for et ikke-poenggivende tillegg til miksen. En Party Play-modus lar spillet automatisk spille sangene med muligheten for en spiller å hoppe inn og spille når som helst.